PRÁCTICA Nº1. Calibración de pipetas de un laboratorio de investigación
Introducción.
Las pipetas son una herramienta básica en cualquier laboratorio de investigación en el que se necesiten preparar disoluciones. Con ellas podremos alicuotar distintos rangos de volúmenes sin cometer un error excesivo. Son de especial interés para volúmenes pequeños (desde 0,1μl a 5 ml) ya que para mayores se dispone actualmente de otro tipo de instrumental como las probetas graduadas.
En función del material de que estén hechas, existen dos grandes tipos:
- – De cristal. Estas pueden ser tanto de volumen fijo como variable. Suelen tener gran precisión y exactitud dependiendo del tipo de cristal (tipo A, B, …). El líquido se toma mediante un sistema de succión manual. No necesitan calibración.
- – De plástico. Dentro de este grupo, cabe destacar las pipetas automáticas, las cuales se basan en el uso de un pistón interno de succión que variamos para permitirnos tomar el volumen deseado. Son más ergonómicas que las anteriores aunque necesitan calibración periódica.
Algunas anotaciones sobre precisión y exactitud de las pipetas.
Cuando adquirimos una pipeta, el fabricante proporciona un certificado de calidad de la misma que nos indica su exactitud y precisión (ver documentos anexos):
- Exactitud (accuracy). La suelen identificar también como error sistemático. Se obtiene mediante el cálculo del porcentaje de error de la media experimental obtenida con respecto al valor teórico. Puede tener signo negativo (implica que alícuota por defecto) o signo positivo (por exceso).
- Precisión (precision). Lo suelen identificar como error aleatorio. Se obtiene con el valor de la desviación estándar que implica todo el intervalo, es decir, dos veces el valor numérico de la desviación estándar.
Las pipetas automáticas sirven para un rango de volúmenes determinado. Suelen estar identificadas con el volumen nominal (el volumen mayor) y el volumen menor, que coincide con un valor 10 de orden de magnitud menor (ejemplo: pipeta de 200 implica poder pipetear desde 20μl a 200 μl). En cuanto a la calibración de las pipetas, esta se debe hacer utilizando el volumen nominal.
Caso práctico.
Queremos comprobar el estado de las pipetas automáticas de tres laboratorios (lab. 201, lab. 202 y lab. 203), los cuales a su vez tienen dos juegos de pipetas. Para ello, hemos puesto en un baño termostatizado un bote con agua destilada a la temperatura de 30ºC (nota: la densidad del agua a esta temperatura es de 0,9956). Con la ayuda de una balanza analítica de precisión 0,001g, hemos realizado las pesadas que aparecen en la TABLA 1
En base a estos datos, resolveremos las siguientes cuestiones:
- Calcular los volúmenes alicuotados por las pipetas.
- Calcular la precisión de las pipetas.
- Calcular la exactitud de las pipetas.
- Utilizando los datos obtenidos, calcula para el volumen nominal si existe diferencia significativa con un valor de significancia del 95% ¿Cuál/cuales están descalibradas?
- Describe brevemente como realizarías la calibración (en el caso de que se pudiera).
- Imagina que tienen que tomar 100μl de disolución. ¿Qué pipeta utilizarías, una 100, una 200 ó una 1000? Justifica tu respuesta en base a los resultados obtenidos desde el punto de vista de la precisión y de la exactitud.